研究文獻 | 20( R)-人參皂苷Rg3人體藥代動力學研究

摘要:

目的：研究20( R)-人參皂苷 Rg3( GRg3)人體藥代動力學。

方法：高效液相色譜-紫外檢測法。

結果：8名健康志愿者單劑量口服3.2 mg·kg -1 GRg 3，其藥時曲線符合口服吸收有滯后時間的二房室模型，T max為( 0.66 ±0.10) h，Cmax為( 16 ±6) ng·mL -1 ，T1/ 2α為( 0.46±0.12) h，T1/2β為( 4.9 ±1.1) h，T1/2( K a)為( 0.28 ±0.04) h, AUC0 -∞為( 77±26) ng·mL -1·h ;6名健康志愿者單劑量口服0.8 mg·kg -1 GRg3，由于血藥濃度低，可測數據點少，未進行模型模擬;兩組給藥劑量與相應C max實測值比較，二者成正比關系。

結論：本品口服吸收快，消除也較快，但血藥濃度很低。在所試劑量范圍內，GRg3屬一級動力學吸收、消除過程。

關鍵詞：20( R )-人參皂苷Rg3 ;高效液相色譜法;藥代動力學

20(R)-人參皂苷Rg3( ginsenoside Rg 3，GRg3)是從人參分離提純的四環三萜類人參二醇型皂苷單體。藥理實驗證明有較明顯的抑制多種癌細胞浸潤和轉移的活性[1-3]，并有抗疲勞、增強機體免疫力等功能[4]。以GRg3為主要成分的抗癌新藥Rg3參膠囊已獲國家藥品監督管理局頒發的中藥一類新藥證書。有關GRg3人體藥代動力學研究尚未見報道。為了闡明人口服GRg3的藥代動力學規律，給臨床合理用藥提供必要資料，我們建立了高效液相色譜法( high-performance liquid chromatography, HPLC)對健康男性進行了該藥人體藥代動力學研究。

材料與方法

藥品和試劑 GRg3 :大連天富科技開發有限公司天然藥物研究所研制，規格膠囊10 mg/粒，批號: 980501;GRg3標準品由大連天富科技開發有限公司天然藥物研究所提供，含量99.69 %;甲醇，乙腈均為色譜醇；異丙醇，分析純；超純水。

儀器 日本導津LC-10AD HPLC泵;美國光譜物理公司Spectra100紫外可見波長檢測器;中科院大連化物所WDL-95工作站、DL-1型固相萃取器、Sep-Pak萃取柱;北京天鵬超聲波清洗機;法國Millipore純水制備儀。

色譜條件Hypersil C18柱, 200 mm ×4.6 mm ID, 5 μm, 中科院大連化物所依利特公司;Hypersil C18預柱, 40 mm ×4.0 mm ID, 10 μm， 中科院大連 化物所依利特公司;流動相：乙腈-異丙醇-水( 43∶1∶ 56) ;流速:0.8 mL·min-1, 檢測波長：UV 203 nm ;檢測靈敏度：0.001 AUFS ;進樣量：100μL 。

血漿樣品的制備 取血漿2.5 mL加60 %甲醇2.5 mL，震蕩混勻，離心( 3 000 r·min -1) 10 min, 全部上清液過Sep-Pak萃取柱，用60 %甲醇4 mL和70 %甲醇2 mL依次沖洗雜質，然后用90 %甲醇1.5 mL 洗脫并收集餾分，于氮氣流室溫水浴吹干，殘留物待測前用60 %甲醇150μL定容，進樣100μL分析，以外標峰面積定量。

受試者 14名男性健康志愿者，年齡( 22.9±2.4)歲，體重( 60.4±5.0) kg。于試驗前經全面體 格檢查，血尿常規、肝腎功能、血壓及心電圖均正常。試驗前兩周停止服用任何藥物，試驗期間未用任何其他藥物并禁忌煙酒。 給藥方法及血樣采集14名健康志愿者按個體隨機分成 3.2 mg·kg -1大劑量組及0.8 mg·kg -1小劑量組。受試者于試驗前日晚20∶00開始禁食，試驗當日晨8∶00空腹用150 mL 溫開水服藥，4 h 后統一進食標準餐。服藥后受試者被安排在I期臨床觀察室內休息，避免長時間臥床和劇烈運動。自始至終保證受試者的安全與健康。于服藥前( 0 h) 及服藥后0.25, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 4.0, 6.0, 8.0, 10.0和12.0 h分別由前臂靜脈采血6 mL，分離血漿并于-20℃凍存待測。

數據分析 對受試者測得的GRg3血藥濃度時 間數據用中國藥理學會數學專業委員會編制的實用藥代動力學計算程序( 3P97)處理，并求算藥代動力學參數。

結果

1 GRg3色譜行為及專一性在上述條件下分析，GRg3的保留時間為16 min，血漿內源性物質不干擾對其原形藥的含量測定，結果見圖1。

2 血漿樣品標準曲線

取空白血漿2.5 mL，加入不同濃度GRg3標準溶液，使血漿中藥物濃度分別為2.5, 5, 10, 20, 50, 100和200 ng·mL -1，按血漿樣品制備方法操作，以GRg3濃度(C)對峰面積(A)進行線性回歸。 GRg3在2.5 -200 ng·mL -1線性關系良好，標準曲線方程為A =-28.96 +342.54C ( n =5, γ=0.9999) 。GRg3在血漿中的最低檢測限為2.5 ng·mL -1。

3 回收率和精密度試驗

配制5, 20, 100 ng·mL -1 3個濃度的GRg3血漿樣品，按血漿樣品制備方法操作，計算方法回收率、日內及日間變異。結果表明在5, 20, 100 ng·mL -1 3個濃度下方法回收率為97.97 % - 99.36 %，日內及日間RSD均<5 %，結果見表1。

4 健康志愿者

GRg3藥代動力學

4 .1口服Rg3的血藥濃度8名健康受試者單劑量口服大劑量3.2 mg·kg -1 GRg 3后各時間點所測得的GRg3血藥濃度-時間曲線見圖2。結果表明口服該藥吸收迅速，血漿藥物濃度呈快α相，慢β相衰減，在2 h處有一轉折。而6名健康受試著單劑量口服0.8 mg·kg -1 GRg3后，血藥濃度很低，給藥后30 min血漿中可測到藥物，1 h達峰，其峰濃度為 ( 4.4±0.8) ng·mL -1 。由于僅少數時間點測到藥物，無法對其動力學模型進行模擬，也無法進行藥代動力學參數計算。大劑量組的Cmax實測值為( 18.5±6.9) ng·mL -1，近似為小劑量組C max實測值( 4.4±0.8) ng·mL -1的4倍。而大劑量組的給藥劑量恰為小劑量組的4倍。隨劑量增大， C max成正比增大，提示在所試劑量范圍內GRg3屬于一級動力學吸收、消除過程。

4 .2 GRg3的藥代動力學參數

將8名受試者血藥濃度-時間數據經3P97程序擬合，符合口服吸收有滯后時間的二室模型。根據二室模型求得的在正常人體內的藥代動力學參數見表2。Tmax為( 0.66±0.10) h，Cmax 為( 16±6) ng·mL -1，說明藥物吸收很快，但血藥濃度很低。T1/2α為( 0.46±0.12) h，T 1/ 2β為( 4.9±1.1) h，提示本品分布和從血漿消除都較快。

討論

測定生物樣品中藥物含量常用的預處理方法是液相萃取法，該法步驟繁瑣，干擾大，價格昂貴且回收率不穩定[5]。因而我們選用固相萃取法進行血漿樣品預處理，不僅提高了G Rg3在生物樣品中的回收率，而且該法簡便、易行[6]。G Rg3在203 nm處有最大吸收，而該波長條件下人體內源性干擾物較多，不易分離，為此我們選用多種條件流動相進行探索。最后為提高靈敏度以適應該藥口服后血藥濃度低的要求，我們選擇了乙腈-異丙醇-水( 43∶1∶56) 為流動相，其保留時間延長到16 min，使得該分析方法符合生物樣品分析要求。本文研究表明，正常國人口服GRg3后藥物從胃腸道吸收很快，服藥后15 -30 min即可在血漿中測到原形藥，給藥后1 h左右血藥濃度可達峰值。GRg3口服后T1/2α為( 0.46±0.12) h，T1/2β為( 4.9 ±1.1) h，表明本品在人體內分布快與消除快。值得注意的是GRg3口服后血漿濃度很低， 3.2 mg·kg -1口服后的C max值僅為( 16±6) ng·mL -1, 0.8 mg·kg -1 口服后的Cmax值僅為( 4.4 ±0.8) ng·mL -1 。一般認為，口服后血藥濃度很低的原因大致有三[7] ：一是口服后經胃腸道吸收的藥量少;二是口服后進入胃腸道藥物被胃腸道內酶或腸道細菌所代謝;三是藥物雖可被胃腸粘膜吸收，但藥物被腸壁或肝臟的酶所代謝，即眾所周知的首過效應。有關GRg3 口服后很低究系何種原因，本文未做分析，有待進一步研究。

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